ÿþDes protéines non mitochondriales à basket puma fenty un transfert Western. Les signaux de bande de PUMA mitochondrial et de PUMA non mitochondrial ont été déterminés par densitomie à l'aide du logiciel NIH ImageJ, comme nous l'avons décrit précédemment [31]. Par la suite, l ampleur de la translocalisation mitochondriale de PUMA, appelée indice mtPUMA, a été calculée à l aide de l équation ci-dessous.Nous avons examiné un panel de huit lignées de cellules GBM et deux lignées de cellules AA pour l'expression de EGFR .

Les résultats (Fig. 1b) ont montré que ces xénogreffes de GBM exprimant EGFRvIII expriment également PUMA, Bax et Bmf. Nous avons également déterminé les niveaux d'expression de PUMA dans les xénogreffes de GBM basket puma homme pas cher avec des taux élevés et faibles d'EGFRvIII et les résultats (Fig. S1 dans Données supplémentaires) ont montré que la xénogreffe D-317 MG co-exprimait EGFRvIII et PUMA et que les D-320 MG et D-456 Les xénogreffes de MG à basket puma montante expression indétectable d'EGFR / EGFRvIII exprimaient PUMA à des niveaux faible et élevé.

EGFR et EGFRvIII coexpriment paradoxalement avec des protéines pro-apoptotiques et interagissent spécifiquement avec PUMA dans le GBM. (A) Expression de EGFR et de protéines pro-apoptotiques dans des lignées cellulaires de gliomes malins humains. Des extraits cellulaires totaux isolés de huit lignées de GBM et de deux lignées de cellules AA ont été soumis à un transfert de Western pour déterminer les taux de protéines basket puma noir pro-apoptotiques EGFR et Bcl-2, y compris Bad, PUMA, Bax, Bim, Bmf et Bok.

EGFRvIII interagit avec PUMA, mais pas Bax et Bmf, dans les xénogreffes GBM. Les protéines extraites de trois xénogreffes de GBM exprimant EGFRvIII, comme indiqué dans le panneau b, ont été soumises à une immunoprécipitation / un transfert de type Western pour déterminer l'étendue de l'interaction de EGFRvIII avec des protéines pro-apoptotiques co-exprimées. Un anticorps anti-EGFR (Ab) a été utilisé pour immunoprécipiter EGFRvIII.

Dans ce contexte, l'EGFR activé à la surface des cellules est endocyté et acheminé vers le RE où il s'associe à Sec61beta, un composant du translocon Sec61, puis est rétrotranslocé du RE au cytoplasme en tant que récepteur non lié à la membrane [37] . Nos résultats dans la Fig. S2 dans basket puma noir femme Données supplémentaires montrent que PUMA interagit principalement avec la protéine EGFR qui n'est pas associée aux membranes plasmiques.

l'étendue de la co-expression de EGFR / EGFRvIII-PUMA est significativement plus élevée dans les gliomes malins de haut grade (20% chez les AA et 34,1% dans les GBM) que dans les gliomes de bas grade (6,3 à 7,7%). ) et des tissus cérébraux normaux (0%). L'analyse de régression indique en outre que l'EGFR seul, PUMA seul et la co-expression EGFR / PUMA sont en corrélation significative avec le degré de gliome.La figure 2b montre deux gliomes immunocolorés représentatifs dans lesquels un GBM.